Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева - ZdorovMnogoLet.ru
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд (пока оценок нет)
Загрузка...

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Работа 4. Подсчет количества лейкоцитов в камере Горяева

Оборудование: микроскоп, камера Горяева, пипетка, капилляр от гемометра Сали, пробирка с резиновой крышкой.

Реагенты: жидкость Тюрка (100 мл 5%-го р-ра уксусной к-ты и 1 мл 1%-го р-ра генциан фиолетового или метиленового синего), спирт, иммерсионное масло.

Камера Горяева – толстое предметное стекло с четырьмя желобами в средней части, между которыми находятся три узкие площадки, средняя из которых ниже боковых на 0,1 мм и разделена пополам поперечным желобком. По обе стороны от этого желобка расположены сетки, нанесенные на стекло. Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 расчерчены вертикальными и горизонтальными линиями на 16 малых квадратов. Подсчет лейкоцитов ведут в счетной камере Горяева под малым увеличением микроскопа в 100 неразграфленных больших квадратах. Большой квадрат равен 16 малым, что соответствует 100 х 16 = 1600 малым квадратам. Единицей отсчета является маленький квадрат. Его сторона равна 1/20 мм, площадь 1/20*1/20=1/400 мм 2 . Объем крови, помещающейся над маленьким квадратом, равен 1/400 мм 2 *1/10 мм=1/4000 мм 3 (1/10 мм – высота слоя крови). из 225 больших квадратов

Ход работы. Покровное стекло притереть к камере Горяева до появления радужных колец.

Установить увеличение микроскопа в 280 раз (окуляр на 7, объектив на 40). Поставить камеру на предметный столик микроскопа, найти сетки, рассмотреть.

Пипеткой взять 0,4 мл жидкости Тюрка (5%-ый раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим) и влить в пробирку.

Набрать кровь в капилляр от гемометра Сали до отметки (0,02 мл); кончик капилляра вытереть ватой; опустить капилляр в пробирку с жидкостью Тюрка; выдуть кровь в пробирку; промыть капилляр, дважды выдувая этот раствор разбавителя. Пробирку закрыть резиновой пробкой, перемешать содержимое. Набрать содержимое пробирки в капилляр. Каплю из капилляра выпустить на среднюю пластинку под притертое покровное стекло к камере Горяева (пузырьки воздуха не должны попасть под покровное стекло). Оставить на 1 мин., чтобы осели клетки крови.

Подсчитать количество лейкоцитов в 100 больших квадратах (или 1600 малых квадратах). Учитывают клетки, находящиеся внутри каждого малого квадрата, на левых и верхних сторонах каждого квадратика. Не считают на нижних и правых сторонах квадрата, т.к. их число учитывается при подсчете лейкоцитов следующего квадрата.

Рассчитать содержание лейкоцитов в 1 м 3 крови. Для этого использовать формулу:

А – количество лейкоцитов в 100 больших квадратах,

4000 – коэффициент для приведения объема к 1 мм 3 (1/4000 мм 3 – объем одного маленького квадрата),

20 – коэффициент разведения крови объемом 0,02 мл,

1600 – количество маленьких квадратов.

Практически для получения действительного содержания лейкоцитов в 1 мкл крови достаточно полученное при подсчете число разделить пополам и приписать 2 нуля (или подсчитанное число клеток крови разделить на 50), ошибка метода составляет ± 7%.

Например, подсчитано 160 лейкоцитов, тогда в абсолютных единицах получаем 8 000 клеток в 1 мкл крови. Для пересчета количества клеток в 1 л (система единиц СИ) необходимо результат умножить на 10 6 , т.е. 8 000*10 6 = 9*10 9 /л.

Оформление работы. Записать или зарисовать последовательность счета клеток в камере Горяева. Подсчитать количество клеток, записать.

Работа 5. Приготовление мазков крови, окрашивание по Романовскому-Гимзе

Оборудование:обезжиренные предметные и шлифовальные стекла, вата, пинцет, пипетка на 10 мл, глазные пипетки, ванночки размером с предметное стекло, карандаш.

Реагенты: кровь рыбы, 70 % этиловый спирт,

В основе методики лежит способность смеси основных (азур II) и кислых красителей (водорастворимый желтый эозин) окрашивать элементы клеток крови в разные цвета и оттенки. Окрашиватся ацидофильные образования в различные оттенки красного цвета, базофильные — в цвета от пурпурного до синего.

Ход работы. Обезжирить предметные стекла

Предметное стекло взять в левую руку между большим и указательным пальцами за короткие грани.

Каплю крови (величиной с зерном пшена) нанести на правый конец стекла (предметным стеклом, углом шлифовального стекла, пипеткой). Капля должна быть такого размера, чтобы конец мазка, приготовленного из нее, не доходил на 1 см до края стекла.

Шлифовальное стекло ставят под углом 45º к основному стеклу у правого края предметного стекла, надвигают на каплю крови так, чтобы у нижнего ребра шлифовального стекла равномерно распределилась капля крови. Распределяют справа налево каплю крови по предметному стеклу равномерно, быстро. Мазок должен быть тонким, ровным, желтоватым, просвечивающимся и отливать должен цветами радуги при просмотре на свет.

А – неравномерный мазок на плохо обезжиренном стекле; Б – короткий мазок; В – длинный и неравномерный мазок; Г – толстый в начале мазок; Д – правильный мазок.

Рисунок 2. Качество приготовленного мазка.

Высушить мазок быстро (под лампой, в термостате, высоко над спиртовкой).

Промаркировать простым карандашом.

Фиксировать в закрытой кювете в этиловом спирте 5 мин., высушить на воздухе.

На дно ч.Петри налить готовую краску Романовского, препарат уложить мазком вниз в краску, закрыть крышкой от ч.Петри (закрытая чашка Петри с увлажнённым фильтром на дне). Мазки окрашивать 20 — 25 минут во влажной камере в термостате при 37 °C.

После окрашивания мазки промыть в проточной воде, сушить на воздухе и исследовать при масляной иммерсии.

Оформление работы. Записать последовательность методики окрашивания.

Последнее изменение этой страницы: 2016-06-23; Нарушение авторского права страницы

Взятие крови и подсчет эритроцитов и лейкоцитов в счетной камере

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

  1. Смесители для эритроцитов и лейкоцитов.
  2. Пробирки типа серологических.
  3. Пипетки на 1 и 5 мл.
  4. Капилляры к гемометру Сали.
  5. Стеклянные палочки.
  6. Глазные пипетки.
  7. Счетные камеры Горяева со шлифованными стеклами к ним.
  8. Микроскопы.
  9. Колбочки с чистой водой.
  10. Поваренная соль.
  11. Сулема.
  12. Сернокислый натрий.
  13. Ледяная уксусная кислота.
  14. 96° этиловый спирт.
  15. Генцианвиолет (метиленовая синька).
  16. Набор для взятия крови из пальца.

Взятие крови в смесители для подсчета эритроцитов и лейкоцитов

Для подсчета количества эритроцитов и лейкоцитов необходимы следующие реактивы:

  1. 3% раствор хлористого натрия (NaCl) : 3 г хлористого натрия помещают в колбочку на 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки 100 мл.
  2. Реактив Гайема: к 0,5 г сулемы, 1 г хлористого и 5 г сернокислого натрия приливают 200 мл дистиллированной воды. Оба реактива сохраняют эритроциты.
  3. 3% раствор уксусной кислоты — 3 мл ледяной уксусной кислоты помещают в цилиндр на 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки. Реактив подкрашивают 1% водным раствором генцианвиолета из расчета 5-6 капель краски на 10 мл 3% уксусной кислоты.

Кровь для подсчета эритроцитов и лейкоцитов берут в специальные смесители или в пробирки.
На чистый и сухой смеситель для эритроцитов надевают резиновую трубочку со стеклянным мундштуком, после чего в него насасывают кровь, без пузырьков воздуха, точно до метки 0,5, затем этим же смесителем набирают 3% раствор хлористого натрия или реактив Гайема точно до метки 101, не допуская появления пузырьков воздуха. При этом кровь разводится в 200 раз. Со смесителя снимают резиновую трубочку, захватывают его между пальцами, несколько раз встряхивают, прокалывают им бумажку, на которой указана фамилия больного, и кладут его на стол в горизонтальном положении.

В чистый сухой смеситель для лейкоцитов таким же способом, как и в смеситель для эритроцитов, насасывают кровь до метки 0,5, после чего тем же смесителем набирают 3% раствор уксусной кислоты до метки 11. При этом кровь разводится в 20 раз. Затем со смесителя снимают резиновую трубочку, несколько раз встряхивают его, прокалывают им бумажку, на которой указана фамилия больного, и кладут на стол в горизонтальном положении.

Читайте также:  Норма лейкоцитов в крови при аппендиците

Взятие крови в пробирки для подсчета эритроцитов и лейкоцитов по Н. М. Николаеву

Для каждого взятия крови берут две нумерованные пробирки, серологическую и агглютинационную. В серологическую пробирку помещают 4 мл 3% раствора хлористого натрия или реактива Гайема, а в агглютинационную — 0,4 мл 3 % раствора уксусной кислоты. В каждую пробирку вносят по 0,02 мл крови, взятой капилляром от гемометра, и тотчас же смешивают содержимое пробирок, вращая их между ладонями.

В серологической пробирке (для эритроцитов) получают разведение крови в 200 раз, а в агглютинационной (для лейкоцитов) — в 20 раз.

Изучение счетной камеры Горяева и заполнение ее кровью для подсчета эритроцитов и лейкоцитов

Количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывают в специальных счетных камерах. Для этой цели пользуются счетной камерой Горяева, которая представляет собой стекло с нанесенными на него двумя сетками. Сетки отделены одна от другой углублениями и делятся разграничительными линиями на 225 квадратов. Площадь сетки 9 мм2, высота, создающаяся при притирании шлифованного покровного стекла в камере, 0,1 мм, объем 0,9 мм3. Перед заполнением камеры кровью ее моют водой и насухо вытирают.

К сухой поверхности камеры притирают шлифованное покровное стекло, плавно продвигая его по ней взад и вперед до появления цветных колец Ньютона в местах соприкосновения покровного стекла со стеклом камеры. Затем кровь в смесителе встряхивают в течение 1-2 минут, после чего из смесителя выпускают на ватку 1-2 капли крови, следующую каплю помещают перед шлифованным покровным стеклом. При нанесении капли крови надо следить за тем, чтобы в пространство над сеткой камеры не попал воздух и чтобы не было избытка жидкости. Одну сетку заполняют для подсчета эритроцитов, вторую — для подсчета лейкоцитов.

Для заполнения камеры Горяева кровью, взятой по способу Н. М. Николаева (пробирочный метод), поступают следующим образом. К счетной камере притирают шлифованное стекло. Из каждой пробирки, предварительно встряхнув ее, с помощью стеклянной палочки с оплавленным концом берут по одной капле жидкости и заполняют ими раздельно обе сетки камеры, для чего каплю помещают перед щелью, образующейся между шлифованным стеклом и счетной камерой, в результате чего жидкость заполняет пространство над сетками.

Подсчёт эритроцитов и лейкоцитов в счетной камере Горяева

Количество эритроцитов и лейкоцитов в камере Горяева подсчитывают с помощью микроскопа. Для этого заполненную разведенной кровью камеру Горяева помещают на предметный столик микроскопа и под малым увеличением (окуляр 15 X или 10Х, объектив 8Х), с опущенным конденсором находят сетку камеры. К подсчету форменных элементов приступают через 2-3 минуты после заполнения камеры кровью.

Эритроциты подсчитывают в пяти квадратах, каждый из которых разделен на 16 маленьких квадратиков. Подсчет начинают с левого верхнего квадрата, а затем продвигают камеру по диагонали сверху вниз. Во избежание повторного подсчета одних и тех же эритроцитов руководствуются следующим правилом: все эритроциты внутри квадратика и на разграничительных линиях подсчитывают только тогда, когда они большей своей половиной заходят внутрь квадратика; клетки, пересеченные разграничительной чертой пополам, подсчитывают лишь на двух сторонах из четырех сторон квадрата (на левой и верхней); клетки, выходящие большей своей половиной за пределы разграничительных линий, совсем не считают.
Результаты подсчета эритроцитов по каждому из пяти больших квадратов записывают и суммируют. Для расчета количества эритроцитов пользуются следующей формулой:

где х — количество эритроцитов в 1 мм3 крови; а — сумма эритроцитов, подсчитанных в пяти квадратах; б — разведение крови в 200 раз; в — количество сосчитанных маленьких квадратиков — 80.

Для упрощения расчета к количеству подсчитанных эритроцитов приписывают четыре нуля.
В норме количество эритроцитов от 4 500 000 до 5 000 000 в 1 мм3 крови.

Лейкоциты подсчитывают в 100 больших квадратах. При подсчете их руководствуются теми же правилами, которые указаны для эритроцитов, а затем производят расчет по приведенной выше формуле, в которой цифра разведения равна 20, а количество подсчитанных квадратов — 1600.
Для простоты расчета количество подсчитанных лейкоцитов умножают на 50 или делят на 2 и приписывают два пуля.
В норме количество лейкоцитов от 5000 до 8000 в 1 мм3 крови.

Чистка смесителей. После подсчета лейкоцитов смесители моют следующим образом: резиновой грушей удаляют остатки крови, после чего их многократно промывают дистиллированной водой, спиртом и просушивают эфиром или в сушильном шкафу. Показателем чистоты смесителей служит свободное передвижение бусинки при встряхивании смесителя.

В последнее время для подсчета эритроцитов и лейкоцитов пользуются целоскопом отечественного производства СФЭК-62, который позволяет быстро и точно определить количество форменных элементов в 1 мм3 крови.
Техника его использования подробно изложена в инструкции, приложенной к прибору.

Вычисление цветного показателя (цветной коэффициент)

Цветной показатель выражает среднее содержание гемоглобина в одном эритроците. В норме цветной коэффициент равняется 1,0 при 100% гемоглобина и 5 000 000 эритроцитов в 1 мм3 крови. Его рассчитывают исходя из следующей пропорции: найденное количество гемоглобина (в единицах) так относится к его нормальному количеству, как найденное количество эритроцитов к их нормальному числу.

Например, если найденный гемоглобин равен 88 ед., а количество эритроцитов 4 8000 000 в 1 мм3, то цветной показатель равен 0,91.

Практически легче рассчитать цветной показатель упрощенным способом: путем умножения найденного количества гемоглобина на 5 и деления полученного произведения на первые три цифры подсчитанных эритроцитов.

При количестве эритроцитов меньше 1 000 000 делить надо на две первые цифры подсчитанного числа эритроцитов. Цветной показатель в норме равен 0,9-1,1.

Определение содержания гемоглобина в одном эритроците (СГЭ)

В последнее время наряду с цветным показателем рассчитывают более достоверную абсолютную величину — содержание гемоглобина в одном эритроците — СГЭ. При расчете этого показателя весовое количество гемоглобина выражают в очень мелких единицах — микромикрограммах (мкмкг), или, что правильнее — пикограммах (пг).
СГЭ получают умножением количества гемоглобина в грамм-процентах на 10 и делением на число эритроцитов в миллионах.

Камера Горяева. Практическое применение

  • Просмотров: 48322

Лабораторная камера Горяева, названная в честь русского врача, профессора Казанского университета Горяева Н.К., является специальным монолитным предметным стеклом, предназначенным для подсчета количества клеток в заданном объеме жидкости. Кроме того, используя камеру Горяева можно определить увеличение микроскопа. Камеры Горяева широко применяются в области клинических и биомедицинских исследований.

Популярные области применение камеры Горяева:

  • Подсчет форменных элементов крови
    • Подсчет эритроцитов
    • Подсчет лейкоцитов
    • Подсчет ретикулоцитов
    • И т.п.
  • Подсчет форменных элементов мочи
  • Исследование эякулята – оценка количественных и качественных параметров сперматозодиов
  • Вычисление концентрации спор в вакцине
  • Подсчет ооцист в препарате
  • И т.п.

Камеры Горяева выпускаются в двух модификациях: двухсеточные (двухкамерные) и четырехсеточные (четырехкамерные). В определении цены камеры Горяева важную роль играет качество шлифовки стекла, метод нанесения сетки – лазерная гравировка или же вакуумное напыление.

Что собой представляет камера Горяева? Камера Горяева есть не что иное, как прозрачное монолитное предметное стекло поперечными прорезями и нанесенной специальным образом микроскопической сеткой. В случае двухкамерной камеры Горяева мы имеем четыре прорези, образующие три поперечно расположенных площадки, при этом средняя площадка разделена продольной прорезью на две одинаковых камеры, на каждой из поверхности площадки которых нанесена сетка. В случае же четырехкамерной камеры Горяева мы получаем предметное стекло с пятью прорезями, образующих четыре площадки, при этом две внутренние дополнительно разделены продольной прорезью для получения четырех камер с нанесенной микроскопической сеткой на поверхности площадок.

Читайте также:  Груша при диабете

Рассмотрим более подробно особенности сетки. Специальная сетка наносится на внутренние площадки, расположенные ниже соседних боковых площадок на 0.1мм. Боковые площадки предназначены для притирания покровного стекла до появления Ньютоновских колец. Как правило, используют специальное покровное стекло для камеры Горяева с закругленными краями. После притирания покровного стекла создается камера, закрытая с двух боковых сторон, а с двух других остаются щели (так называемые, капиллярные пространства), через которые и заполняют камеру. Что конкретно представляет собой сетка? Микроскопическая сетка камеры Горяева расчерчена на большие и маленькие квадраты, сгруппированные различными способами. Сетка Горяева содержит 225 больших квадратов (15 рядов по 15 больших квадратов в каждом), разграфленных вертикально, горизонтально, крест-накрест и неразграфленных. При этом размеры малых делений клетки сетки составляют 0.05мм, а больших – 0.2мм. Важно, что малый квадрат со стороной 0.05мм во всех сетках является постоянной величиной. Не трудно рассчитать, что площадь малого квадрата равна 0.0025 мм2, а большого квадрата – 0.04мм2 . Тогда получаем, что объем жидкости над квадратом, образованным большими делениями сетки Горяева, составляет 0.004 микролитра.

Подсчитав количество форменных элементов (ФЭ) над большим квадратом, можно подсчитать плотность данного типа клеток в суспензии по формуле:

где X — количество ФЭ/мл, M- количество ФЭ над большим квадратом.

При работе с камерой Горяева важно следить, чтобы ее рабочие поверхности оставались сухими и чистыми. Кроме того, при подсчете форменных элементов нельзя допускать наличие воздушных пузырей на сетке камеры, так как они могут мешать точности подсчета.

После работы с камерами Горяева следует выполнить их дезинфекцию одним из допустимых способов:

  1. Погружение в 70%-ный раствор этилового спирта на 30 минут
  2. Погружение в 4%-ный раствор формалина на 60 минут при комнатной температуре.

Приведем примеры применения камеры Горяева и некоторые формулы.

Практическое применение камеры Горяева

Прежде чем приступить к проведению лабораторных исследований, рекомендуется тщательно протереть камеру Горяева небольшим кусочком чистого бинта, слегка смоченного в спирте. Мы не советуем использовать для этих целей вату, так как она может оставить волокна. Таким же образом следует обработать и покровное стекло для камеры Горяева. Учтите, что при использовании низкокачественного спирта на поверхностях может образоваться осадок, тем или иным образом мешающий проведению исследований. Чтобы избежать появления связанных с этим явлением нежелательных эффектов, рекомендуется дополнительно протереть камеру и покровное стекло чистым марлевым шариком без спирта. Притирание покровного стекла к камере должно быть выполнено очень тщательно до появления на месте контакта радужных колец (так называемых, цветных колец Ньютона) с обоих краев. Для лучшего притирания можно воспользоваться одной хитростью и слегка выдохнуть воздух на камеру и покровное стекло, так чтобы небольшое количество влаги сконденсировалось на поверхностях стекол, что обеспечит лучший контакт.

При отсутствии специальных покровных стекол, прилагающихся к камере Горяева, можно использовать обычные стандартные покровные стекла.

Помимо целевого использования камеры Горяева для подсчета форменных элементов крови и т.п., данное стекло может расцениваться как своеобразный эталон для определения увеличения микроскопа. Для этого следует воспользоваться следующей формулой:

X=(p1-p2)/(a*N)

где X – это увеличение микроскопа; p1 – положение левой границы клетки камеры Горяева; p2 – положение правой границы клетки или группы клеток; N – количество клеток между измеряемыми границами; a — размер клетки камеры Горяева (равен 0,05 мм).

Камера Горяева также используется для подсчёта количества клеток в культуре.

Для подсчета клеточных элементов в жидкостях, содержащих их в меньших концентрациях, используются аналогичные по конструкции камеры Фукса-Розенталя и Нажотта, имеющие большую глубину – 0.2 мм и 0.5 мм соответственно. Эти же камеры используются в альгологии для количественного учета фитопланктона. Часто камера Фукса-Розенталя используется для подсчета форменных элементов спинномозговой жидкости. В отличие от камеры Горяева, большие квадраты сетки Фукс-Розенталя не разграфлены и сгруппированы по 16 квадратов, причем каждая такая группа ограничена тройными линиями.

Подсчет форменных элементов крови

Наиболее часто камеры Горяева используются именно для определения форменных элементов крови при проведении лабораторных исследований. Так для подсчета эритроцитов кровь необходимо развести в 200 раз, лейкоцитов – в 20 раз. Количество форменных элементов (ФЭ) в 1мкл крови определяют по формуле:

где N – искомое количество ФЭ в 1 мкл крови; m – число ФЭ в определенном количестве малых квадратов; q – количество малых квадратов сетки камеры Горяева, в которых подсчитывались ФЭ, s – степень разведения крови.

Формула для подсчета эритроцитов

Для подсчета эритроцитов используются 5 больших или 80 малых квадратов сетки, расположенных по диагонали. Таким образом, получаем следующую формулу:

Формула для подсчета лейкоцитов

Для подсчета лейкоцитов можно использовать один из трех методов:

1. Лейкоциты считают в 64 больших (пустых) квадратах

2. ​ Лейкоциты считают по всей сетке в 169 больших квадратах (рекомендуется для образцов крови с выраженной лейкопенией)

3. Лейкоциты считают в 100 больших квадратах (64 пустых + 36 разграфленных квадратов по периметру сетки)

Таблица нормальных значений:

Форменные элементыНорма
ЭритроцитыМужчины4 000 000 – 5 100 000 в 1 мкл
Женщины3 700 000 – 4 700 000 в 1 мкл
Лейкоциты4 000 – 9 000 в 1 мкл

Подсчет форменных элементов в мочевом осадке

Для определения ФЭ в мочевом осадке при анализах мочи по Нечипоренко, Аддис-Каковскому, Амбурже осуществляется по всей сетке Горяева и рассчитывается по формуле:

где N – число ФЭ в 1 мкл осадка; m – число ФЭ, подсчитанных по всей сетке; 0.676 – объем камеры Горяева (мкл)

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Работа с камерой Горяева

Камера Горяева – оптическое устройство для подсчета клеток или иных соизмеримых с ними частиц в заданном объеме жидкости. Состоит из толстого предметного стекла, имеющего прямоугольное углубление (камеру) с нанесенной микроскопической сеткой и тонкого покровного стекла. Камера разработана профессором Казанского университета Горяевым Н.К. Благодаря увеличенному объему сетки отличается большей точностью подсчета, по сравнению с другими камерами (Тома, Цейса, Тюрка, Бюркера).

Технические характеристики камеры Горяева

Размеры малого квадрата камеры Горяева 0,05×0,05 мм
Размеры большого квадрата камеры Горяева 0,2×0,2 мм
Глубина камеры 0,1 мм
Объем жидкости под 1 малым квадратом 0,00025 мм3 (мкл) = 1/4000 мм3 (мкл)
Объем жидкости под 1 большим квадратом 0,004 мм3 (мкл) = 1/250 мм3 (мкл)
Объем камеры Горяева 0,9 мм3 (мкл)

Описание сетки камеры Горяева

Сетка камеры Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 разделены на 16 малых квадратов.


Рис 1. Сетка камеры Горяева


Рис 2. Большой (1) и малый (2) квадраты сетки камеры Горяева


Рис 3. 225 больших квадратов сетки камеры Горяева


Рис 4. 100 больших квадратов сетки камеры Горяева


Рис 5. Большой квадрат камеры Горяева разделенный на 16 малых квадратов.

Читайте также:  Низкие тромбоциты у ребенка

Обслуживание камеры Горяева

Между работой камера должна храниться в сухом месте. После работы камера дезинфицируется погружением на 30 минут в 70% раствор этилового спирта, или на 60 минут в 4% раствор формалина, после чего камера промывается дистиллированной водой и протирается мягкой салфеткой.

Правило подсчета клеток в квадрате (правило Егорова)


В квадрате считаются клетки, лежащие внутри его, а также касающиеся левой и верхней границ. Клетки, касающиеся правой и нижней границ при подсчете не учитываются.

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Развести образец исследуемой крови в 20 раз 3–5% раствором уксусной кислоты с метиленовым синим (например, 20 мкл крови и 380 мкл р-ра уксусной к-ты). Камеру и покровное стекло насухо протереть марлей. Недопускается использование для протирки ватных тампонов из-за остающихся на стекле волокон. Аккуратно притереть покровное стекло к камере, слегка надавливая на него до появления цветных колец Ньютона. Заполнить камеру разведенной кровью и выдержать 1 минуту для прекращения движения клеток. При малом увеличении (окуляр ×10, объектив ×8) посчитать лейкоциты в 100 больших квадратах. Расчет числа лейкоцитов осуществляют, исходя из разведения крови (20) и числа больших квадратов (100), по формуле: X = (a×250×20) / 100, где Х – число лейкоцитов в 1 мкл крови; а – число лейкоцитов, посчитанных в 100 больших квадратах камеры Горяева. Практически, после сокращений в формуле, количество посчитанных лейкоцитов умножают на 50.

Методика подсчета эритроцитов в камере Горяева

Развести образец исследуемой крови в 200 раз в 0,9% растворе NaCl или растворе Гайема (берется 20 мкл крови и 4 мл раствора). Камеру и покровное стекло насухо протереть марлей. Недопускается использование для протирки ватных тампонов из-за остающихся на стекле волокон. Аккуратно притереть покровное стекло к камере, слегка надавливая на него до появления цветных колец Ньютона. Заполнить камеру разведенной кровью и выдержать 1 минуту для прекращения движения клеток. При малом увеличении (окуляр ×10, объектив ×8) посчитать эритроциты в 5 больших квадратах разделенных на 16 малых (т.е. в 80 малых квадратах). Рекомендуется считать клетки в квадратах, расположенных по диагонали. Расчет числа эритроцитов осуществляют, исходя из разведения крови (200) и числа малых квадратов (80), по формуле: X = (a×4000×200) / 80, где Х – число эритроцитов в 1 мкл крови; а – число эритроцитов, посчитанных в 80 малых квадратах камеры Горяева. Практически, после сокращений в формуле, количество посчитанных эритроцитов умножают на 10 000.

Подсчет лейкоцитов и эритроцитов в камере Горяева

Что такое камера Горяева, ее технические характеристики

Камера Горяева представляет из себя простое устройство для визуального подсчета форменных элементов крови под микроскопическим увеличением. Оно сконструировано на основе предметного стекла, имеющего специальные углубления для номинального объема крови, а также покровного стекла с нанесенной сеткой.

Различают несколько конструкций камеры Горяева в зависимости от количества камер (углублений для заполнения кровью), чаще всего в лабораториях применяются двухкамерные или четырехкамерные модели. Над каждой из камер находится специальная счетная сетка, нанесенная на покровное стекло методом лазерной гравировки либо при помощи микронапыления краски.

Приспособление сконструировано таким образом, что все имеющиеся камеры имеют равный объем, который указан в технической документации модели, их глубина и размеры секторов покровной сетки также стандартны. Это делает возможным переводить после подсчета форменных элементов их суммарные значения в единицы концентрации заданных клеток в объеме крови.

Описание сетки камеры Горяева

Покровное стекло имеет гравировку в виде сетки, большие квадраты которой имеют величину стороны в 1 мм. Чаще всего таких квадратов 9 над каждой счетной камерой, они расположены так, что образуют три столбца по три квадрата в каждом. Те большие квадраты, что располагаются по периферии, разделены на 16 квадратов поменьше, длина и ширина которых равны 0,2 мм. Стандартная глубина камеры под этими квадратами позволяет легко подсчитывать количество клеток в единицах объема, он равен для них 0,1 мм 3 или 10 -4 мл.

Большой квадрат, расположенный посередине, имеет дополнительные разделяющие линии, они нанесены так, что делят каждый из 16 средних квадратов еще на 16 самых маленьких. Их сторона равна 0,05 мм.

Правило Егорова для подсчета форменных элементов

Подсчет форменных элементов крови ведется под микроскопом с применением соответствующего увеличения, чаще всего используется окуляр х10. Подсчитывают число клеток в тех больших квадратах, что разделены на 16 средних, начинают считать от верхнего левого и двигаются вниз направо, захватывая при подсчете 5 больших квадратов.

Для того, чтобы верно определить количество клеток в заданном объеме крови, необходимо исключить повторный подсчет тех форменных элементов, что располагаются на границах или узлах сетки. Такая ошибка привела бы к увеличению подсчитываемого показателя, для ее устранения было сформулировано правило Егорова. Оно гласит, что к данному квадрату относятся те элементы, что лежат в его пределах, не касаясь нанесенных линий, а также те клетки, что располагаются на верхней и левой сторонах квадрата. Те клетки, что «касаются» нижней или правой стороны, при подсчете учитываться не должны.

Методика подсчета лейкоцитов

Для подсчета лейкоцитов в крови в современных клинических лабораториях чаще всего используются специальные автоматические анализаторы, методика подсчета при помощи камеры Горяева относится к редко применяемым из-за своей трудоемкости и низкой скорости анализа. Для того, чтобы верно определить концентрацию отдельных видов лейкоцитов, требуется врач лабораторной диагностики или фельдшер-лаборант, владеющий навыками работы с микроскопом.

Для подсчета отдельных видов лейкоцитов кровь разводят в несколько раз слабым раствором уксусной кислоты, при этом образцы без лейкоцитоза, как правило, следует разводить не менее чем в 20 раз, в случаях выраженного увеличения количества белых кровяных телец может потребоваться большее разведение. Для контрастирования изображения применяют окрашивание метиленовой синью.

После заполнения камер исследуемым объемом крови сверху накладывается покровное стекло сеткой и производится ее притирка, в ходе которой должны полностью исчезнуть пузыри воздуха между двумя стеклами. Заполненная камера помещается под микроскоп, причем целесообразно оставить ее неподвижной на 1-2 минуты для того, чтобы форменные элементы полностью прекратили движение и осели.

После этого на среднем увеличении (окуляр не менее чем х10) проводится подсчет отдельных видов лейкоцитов в не менее чем 100 квадратах. Для перевода получившегося числа в объемные значения необходимо умножить его на разведение (как правило, в 20 раз) и на количество квадратов, участвовавших в подсчете (чаще всего 100). Полученное число дает представление о количестве лейкоцитов в 1 мкл крови.

Методика подсчета эритроцитов

Исследуемую кровь разводят при помощи физиологического раствора минимум в 100 раз для того, чтобы стал возможен визуальный подсчет красных кровяных телец. При недостаточном разведении в камерах образуется двойной слой форменных элементов крови, что делает невозможным их определение. После наложения покровного стекла и притирки проводят микроскопирование препарата при увеличении окуляром х10. Подсчет ведется во всех 5 больших квадратах, разделенных линиями на 16 секторов. Расчет объемных значений проводят при помощи умножения полученного числа эритроцитов на степень разведения (чаще в 100 или 200 раз) и на 4000, затем проводят деление полученного числа на 80 (количество малых квадратов при подсчете). Полученное число характеризует количество эритроцитов в 1 мкл крови.

Ссылка на основную публикацию